Проверочное определение (типирование) группы крови по AB0 системе производится, как правило, перекрестным методом, поскольку этот вариант проведения исследования дает более точный результат и позволяет определить такие редкие группы крови, как A2 и A2B (слабая форма антигена A – A2) и «бомбейский фенотип» (особая группа крови). Для проведения перекрестного типирования необходимы и растворы антиэритроцитарных антител (например, цоликлоны Анти-A, Анти-B и анти-AB), и стандартные эритроциты групп крови 0(I), A(II), B(III). Перекрестный метод определения группы крови https://sangvitest.ru/perekrestnyj-metod-opredeleniya-gruppy-krovi/ проводится, как правило, на планшете (на плоскости), дополнительно необходимы песочные часы (или секундомер), шесть стеклянных палочек и пипеток Пастера. При проведении анализа необходимо использовать средства индивидуальной защиты (любые образцы крови должны считаться патогенно опасными, если достоверно не установлено обратное), а само исследование проводить в хорошо освещенной лаборатории.
Перекрестный метод определения группы крови проводится так:
1) на промаркированном уникальным образом (ФИО пациента/реципиента трансфузии/донора крови, дата проведения исследования, дата забора крови) размечаются шесть позиций: три для цоликлонов (анти-A, анти-B, анти-AB) и три для стандартных эритроцитов (0, A, B), позиции удобно размечать в два ряда;
2) образец исследуемой крови отстаивается в пробирке при комнатной температуре (около 30-ти минут) до разделения сыворотки и эритроцитов, сыворотка отбирается пипеткой в другую пробирку;
3) в соответствии с размеченными позициями на планшет раскапываются цоликлоны (примерно 0,1 мл) и стандартные эритроциты (примерно 0,3 мл);
4) рядом с каждой каплей цоликлонов пипеткой Пастера помещается капля с эритроцитами исследуемой крови;
5) рядом с каждой каплей стандартных эритроцитов помещается капля сыворотки исследуемой крови;
6) стеклянной палочкой растворы цоликлонов перемешиваются с исследуемыми эритроцитами, а стандартные эритроциты с исследуемой сывороткой. Для каждого перемешивания берется новая чистая палочка;
7) В течение пяти минут производится наблюдение за смесями при медленном покачивании планшета в двух плоскостях.
Возможные следующие варианты:
а) агглютинация исследуемых эритроцитов (их слипание в хлопья и глобулы с последующим выпадением в осадок) произошла при смешивании со всеми цоликлонами, а исследуемая сыворотка не дала агглютинации ни с одним из стандартных эритроцитов, исследуемый образец принадлежит группе AB (IV);
б) агглютинация исследуемых эритроцитов при смешивании со всеми цоликлонами отсутствует, а исследуемая сыворотка дает реакцию агглютинации со стандартными эритроцитами A и B, исследуемый образец принадлежит группе 0 (I);
в) если агглютинация эритроцитов исследуемой крови произошла с цоликлонами анти-A и анти-AB, а агглютинация сыворотки со стандартными эритроцитами B, то образец типируется как имеющий группу A (II);
г) если агглютинация эритроцитов исследуемой крови произошла с цоликлонами анти-B и анти-AB, а агглютинация сыворотки со стандартными эритроцитами A, то образец типируется как имеющий группу B (III).
Для первого случая проводится проверочное исследование (исключение неспецифичной агглютинации): эритроциты из образца крови смешиваются с физраствором (0,9% натрия хлорид водный), в течение 3-5 минут реакции агглютинации происходить не должно.